Phylogenetic analyses of Chlamydia psittaci ompA gene sequences from captive blue-fronted Amazon parrots (Amazona aestiva) with hepatic disease in Brazil.

Chlamydia psittaci was detected in 152 (72%) blue-fronted Amazon parrots (Amazona aestiva, parrot from the Psittacidae family) out of a population of 212 that died during 2009-2011 in a wildlife rescue and rehabilitation centre in Minas Gerais, Brazil, following rescue from illegal wildlife trafficking. The macroscopic changes observed in these animals were hepatomegaly with multifocal white foci visible at the serosal surfaces of the liver, and extending into the parenchyma, and splenomegaly. The microscopic lesions observed in the liver included multifocal to coalescing miliary necrosis of hepatocytes with infiltration by heterophils, lymphocytes and plasma cells. In the spleen, loss of the normal architecture and infiltration by macrophages and plasma cells were observed. Stained tissue sections (Gimenez technique) revealed small round clusters suggestive of C. psittaci (reticulate bodies) in the cytoplasm of macrophages from the liver and spleen. Nine sequences of segments of the ompA gene, obtained from different individuals, were randomly selected for sequencing. The phylogenetic analyses showed that all strains clustered with genotype A, which is the most virulent genotype for birds. This genotype is involved in mortality of psittacines, is easily transmitted in captivity and represents a problem for successful rehabilitation. The results indicate the necessity to improve biosecurity in triage and to provide individual personal protection for professionals and caretakers.

Chlamydia psittaci a été détectée chez 152 (72 %) amazones à front bleu (Amazona aestiva, perroquet de la famille des Psittacidés) sur un total de 212 individus rescapés du trafic illégal et décédés en 2009 et 2011 dans un centre de sauvetage et de réhabilitation de la faune sauvage à Minas Gerais (Brésil). Les modifications macroscopiques observées sur ces oiseaux étaient une hépatomégalie avec des foyers blancs multifocaux visibles sur les surfaces séreuses du foie et s'étendant dans le parenchyme, et une splénomégalie. Les lésions microscopiques observées dans le foie comprenaient une nécrose miliaire multifocale à coalescente des hépatocytes avec infiltration d'hétérophiles, de lymphocytes et de plasmocytes. Dans la rate, une perte de l'architecture normale et l'infiltration de macrophages et de plasmocytes ont été observées. La coloration de coupes de tissus (technique de Gimenez) a révélé de petites grappes rondes évoquant C. psittaci (corps réticulés) dans le cytoplasme des macrophages du foie et de la rate. Neuf produits segmentés d'une partie du gène ompA, obtenus de différents individus, ont été sélectionnés de manière aléatoire pour le séquençage. Les analyses phylogénétiques ont montré que toutes les souches se regroupaient dans le génotype A, qui est le plus virulent pour les oiseaux. Ce génotype est responsable de cas de mortalité chez les psittacidés et se transmet facilement en captivité, ce qui représente un risque pour la réussite des opérations de réhabilitation. Au vu de ces résultats, les auteurs soulignent la nécessité d'améliorer la biosécurité lors du tri des animaux dans les centres de soins et de fournir une protection individuelle aux professionnels et aux gardiens.

Se detectó Chlamydia psittaci en 152 (72%) amazonas frentiazules (Amazona aestiva, loro de la familia Psittacidae) de un total de 212 que murieron durante 2009­2011 en un centro de rescate y rehabilitación de fauna silvestre de Minas Gerais, Brasil, tras haber sido rescatadas del tráfico ilegal. Los cambios macroscópicos que se observaron en estos animales fueron hepatomegalia con focos blancos multifocales visibles en las superficies serosas del hígado y que se extendían hacia el parénquima, y esplenomegalia. Las lesiones microscópicas observadas en el hígado consistieron en necrosis miliar multifocal a coalescente de hepatocitos con infiltración de heterófilos, linfocitos y células plasmáticas. En el bazo, se observó pérdida de la arquitectura normal y infiltración de macrófagos y células plasmáticas. Cortes de tejido teñidos (con la técnica de Giménez) revelaron pequeños racimos redondos que sugerían la presencia de C. psittaci (cuerpos reticulados) en el citoplasma de macrófagos del hígado y del bazo. A partir de distintos individuos, se escogieron aleatoriamente nueve segmentos del gen ompA para ser secuenciados. Los análisis filogenéticos mostraron que todas las cepas correspondían al genotipo A, que es el más virulento para las aves. Este genotipo está involucrado en la mortalidad de psitácidas, se transmite fácilmente en cautiverio y supone un riesgo para el éxito de la rehabilitación. Los resultados indican la necesidad de mejorar la bioseguridad en el triaje y de procurar protección personal individual a profesionales y cuidadores.

Occurrence of Aviadenovirus in chickens from the poultry industry of Minas Gerais / Ocorrência de Aviadenovirus em aves da industria avícola de Minas Gerais

The occurrence of Aviadenovirus (FAdV) was investigated in chickens from the poultry industry of Minas Gerais state, Brazil. The investigation was conducted due to the scarcity of recent data in the country and its description in neighboring countries. For this purpose, livers were collected from layer chicks (n=25), older layers (n=25), broilers (n=300), and livers (n=25) and stool (n=25) samples from broiler breeders, representing the major poultry regions of the state. FAdV DNA was demonstrated using a previously described PCR protocol for amplifying part of the hexon gene encoding sequence. FAdV was found in layer chicks (36 percent), widespread (100 percent) in older layers, and with regional differences in broilers (24-86 percent). Although all broiler breeder stools were negative, FAdV DNA was detected in livers (16 percent, 4/25) of stool-negative birds. In order to obtain additional information on the circulation of the infection, livers of subsistence chickens collected from one poultry intensive region, were evaluated (n = 12), with FAdV being detected in all samples. FAdV was found in young and old layers, broilers, broiler breeders and free-range chickens, and results suggest the circulation of FAdV among different types of chickens. The detection in older layer chickens may indicate an extended risk of horizontal transmission in regions of Minas Gerais with mixed activity of egg and meat type chickens and poor biosecurity strategies. The infection in breeders may indicate vertical transmission and the continuous production of infected progenies. The hexon-gene-targeted PCR amplicon sequences aligned with FAdV of species D of Aviadenovirus. Results indicate the necessity for biosecurity, especially for breeders, separating flocks according to origin, age and health status, which will be an advantage regarding any pathogen...

Descreve-se a ocorrência de Aviadenovirus (FAdV) na avicultura mineira. Foram amostrados fígados de poedeiras jovens (n=25) e velhas (n=25) e de frangos de corte (n=300). Em matrizes pesadas foram amostrados fígados (n=25) e fezes (n=25). O estudo envolveu as principais regiões avícolas do Estado de Minas Gerais. O DNA de FAdV foi pesquisado por PCR universal, descrito para a amplificação do gene que codifica o hexon de Aviadenovirus, usando FAdV Phelps como referência. Foi demonstrada a presença do DNA de FAdV em 100 por cento (25/25) das poedeiras velhas (78 semanas de idade) e em 36 por cento (9/25) das jovens (18 dias). Em frangos de corte, a detecção variou entre 24 e 86 por cento. Embora as fezes das matrizes tenham sido negativas, foi obtido o amplicon específico em 4/25 dos fígados dessas mesmas aves, indicando menor sensibilidade para detecção nas fezes. Em amostras da avicultura familiar (fígado), colhidas de uma das regiões de avicultura intensificada, foi detectado o genoma de FAdV em 100 por cento das galinhas (n=12). A constatação de alta disseminação de FAdV em aves da avicultura industrial e familiar de Minas Gerais contribui para o entendimento da epidemiologia de Aviadenovirus. As sequências nucleotídicas dos produtos de PCR alinharam com FAdV da espécie D de Aviadenovirus. A demonstração de FAdV em reprodutores indica risco de transmissão vertical e reforça a necessidade de biosseguridade estrita nesses plantéis. A presença de FAdV em diversos setores avícolas, incluindo poedeiras comerciais, frangos de corte, reprodutores e galinhas da avicultura familiar, recomenda a biosseguridade estrita entre as criações de mesmo tipo e de tipos diferentes de aves. A detecção em matrizes pode indicar a continuada geração de progênies infectadas...

Molecular characterization of contaminating infectious anemia virus of chickens in live commercial vaccines produced in the 1990s.

The presence of infectious chicken anemia virus (CAV) was detected in a previous study by nested-PCR as a contaminant in seven commercial vaccines, produced in the 1990s by three different manufacturers, prepared against the most relevant virus etiologies. In order to phylogenetically characterize the genome and compare it to CAV isolates from Brazil and other parts of the world, sequences of approximately 675 bp of the gene encoding the hypervariable region of VP1 protein of three CAV vaccine contaminant strains were studied. The CAV genome in contaminated vaccines showed high similarity (> 98.9%) with the Brazilian BR91/99 and Argentinian ArgA001028 (> 99%) strains. However, the comparison with the Cuxhaven-1 vaccine strain showed a lower identity of between 96.8% and 97.7%, and comparing it with the CAV26P4 vaccine strain showed an identity between 97.2% and 98.2%; both are available in Brazil. Such differences might be relevant for the highly conserved CAV genome. CAV contaminants were positioned in the same genetic group (clusters) with the Brazilian strain BR91/99 and Argentinian strain ArgA001028. Results indicated that the contamination of live vaccines by CAV may have influenced CAV epidemiology in the Brazilian and Argentinian poultry industry.

The occurrence of orthoreovirus, rotavirus and chicken anemia virus in chickens of the poultry industry in Minas Gerais, Brazil / Ocorrência de orthoreovirus, rotavirus e vírus da anemia das galinhas em frangos de corte da indústria avícola de Minas Gerais

Fifty-four fecal samples taken from broiler chickens from 1 to 45 days of age, and of pullets from 10 to 13 weeks of age, original from eight different poultry regions in the state of Minas Gerais, Brazil, were collected from March 2008 to January 2010 for avian Orthoreovirus (ARV) and avian Rotavirus (AvRV) analyses. For the assay of ARV, RNA was immediately extracted (Trizolâ) and transcribed into cDNA for assaying in a nested-PCR with ARV-specific primers. For AvRV, polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) was performed with RNA extracts obtained by phenol-chloroform extraction. CAV was additionally investigated through a nested-PCR of thymus and spleen. Results found 5.55% positive for ARV and 9.25% for AvRV. Also, CAV and ARV genomes were detected in co-infection, in a highly prostrated and claudicating chicken flock. No ARV or AvRV infections were detected in pullets. Material of a clinically affected flock was inoculated into SPF embryos, resulting in embryonic hemorrhage, whitish foci in the chorio-allantoic membrane and death. Sequencing of ARV amplicons and isolate cDNA grouped local strains with the ARV S1133 strain, historically used in live vaccines, suggesting the continued circulation of this vaccine virus strain in intensive poultry regions. Detection rates for ARV and AvRV, as well as the presence of CAV, were additionally indicative of failing biosecurity strategies for the intensive poultry regions examined.

Avaliou-se a ocorrência de Orthoreovirus (ARV) e Rotavirus (AvRV) aviários na avicultura industrial de Minas Gerais. Foram colhidas cinquenta e quatro amostras de fezes de frangos de corte entre um e 45 dias e de frangas de postura de 10 a 13 semanas de idade. Para análise de ARV, o RNA foi imediatamente extraído (Trizol), transcrito em cDNA e avaliado em uma PCR com oligonucleotídeos iniciadores específicos para ARV. Para a investigação de AvRV, os extratos de RNA foram obtidos por fenol-clorofórmio e submetidos à eletroforese em gel de poliacrilamida. Todas as amostras foram também avaliadas para o DNA do vírus da anemia das galinhas (CAV) em uma nested-PCR específica. Em frangos de corte, a positividade encontrada para ARV foi de 5,55% e para AvRV de 9,25%. CAV foi detectado em coinfecção em um plantel com refugagem, claudicação e prostração. Nenhuma amostra de poedeiras foi positiva para ARV ou AvRV. Material de plantel com sinais clínicos foi purificado e inoculado em ovos SPF embrionados, sendo obtidas lesões hemorrágicas e focos brancos na membrana cório-alantóide. O sequenciamento dos produtos de PCR e de embrião agrupou os isolados de ARV com a estirpe S1133, historicamente usada como vacina viva. Os resultados sugerem a continuada circulação da infecção por estirpes assemelhadas a ARV S1133 nas regiões de avicultura industrial. Os índices de detecção de ARV, AvRV e CAV indicam que a intensificação nas regiões produtoras tem resultado em falhas de biosseguridade.

A retrospective PCR investigation of avian Orthoreovirus, chicken infectious anemia and fowl Aviadenovirus genomes contamination in commercial poultry vaccines in Brazil / Estudo retrospectivo de vacinas avícolas vivas por PCR para os vírus da anemia das galinhas, Aviadenovirus aviário e Orthoreovirus aviário

Vacinas avícolas vivas comerciais produzidas entre 1991 e 2005 foram examinadas para a presença de genomas dos vírus da anemia infecciosa das galinhas (Gyrovirus CAV), da hepatite por corpúsculo de inclusão (Aviadenovirus FAdV) e da artrite viral/síndrome da má absorção (Orthoreovirus aviário ARV). Vinte e seis partidas de vacinas vivas liofilizadas de oito fabricantes com lacre original foram examinadas. As extrações de DNA e PCR de CAV e FAdV, e de RNA e RT-PCR para ARV, foram descritas previamente. Contaminações triplas de ARV, CAV e FAdV foram detectadas em vacinas de mesmo fabricante, produzidas em 1991 e 1992 contra a doença de Newcastle (DN), e para a encefalomielite aviária, produzida em 1994. ARV e CAV em co-infecção foram encontrados em vacinas contra a doença de Marek liofilizadas produzidas em 1996 por dois fabricantes diferentes. Genoma de ARV foi detectado em vacinas contra a bronquite infecciosa de setembro e dezembro de 1998, doença infecciosa bursal, de dezembro de 1998 e DN de janeiro de 1998. Três dos oito fabricantes apresentaram vacinas com contaminação e cinco nunca apresentaram vacinas contaminadas. Nenhuma vacina produzida a partir de 2001 apresentou contaminação. Cogita-se um papel epidemiológico para vacinas vivas, como fonte de infecção para ARV, CAV e FAdV e, potencialmente determinante da atual alta disseminação destes.

Ostrich (Struthio camelus) gastric diseases in Minas Gerais, Brazil, from 1997 to 2009 / Doenças gástricas de avestruzes em Minas Gerais

Descrevem-se as doenças gástricas de avestruzes diagnosticadas em um Laboratório de Doenças das Aves, Belo Horizonte-MG, entre 1997 e 2009. As afecções gástricas corresponderam a 46,2% de todos os casos de doença, com quadros que incluíram impactação (83,3%), infecções e parasitoses (16,7%). As impactações foram causadas por material não alimentar diversificado e as infecções e parasitoses incluíram o fungo Macrorhabdus ornithogaster (megabacteria) e o nematódeo Libyostrongylus douglassii.

ELISA indireto para detecção de IgG antivírus da doença de Newcastle em soro de codorna / Indirect ELISA for the detection of IgG specific to Newcastle disease virus in quail serum

An indirect ELISA for the detection of japanese quail IgG specific to Newcastle disease virus (NDV) was developed. The secondary anti-quail IgG was produced in Balb/c mice, by inoculating Freund's complete adjuvant emulsified japanese quail-IgG extract. The purification of IgG was achieved using the caprilic acid method. The ELISA was compared to the haemagglutination-inhibition (HI) test for antibodies to NDV. ELISA cut-off point was established through TG-ROC analysis. Total correlation was observed between the ELISA and the HI, being the ELISA efficient in the identification of positive and negative sera, with high sensitivity and specificity (100 percent). These results validate the use of the indirect ELISA as an alternative for the detection of NDV-specific IgG in japanese quail sera, with the advantage of high sensitivity and automation

Apoptose e expressão de VP2 e GAPDH na infecção precoce pelo vírus da doença infecciosa da bursa de Fabricius em pintos SPF / Apoptosis and expression of VP2 and GADPH in an experimental infectious bursal disease in SPF chicks

Vinte e nove pintos SPF de um dia foram inoculados com o vírus da doença infecciosa da bursa de Fabricius (VDIB) para avaliar a ocorrência precoce de apoptose e a expressão da proteína viral 2 (VP2) e da enzima gliceraldeído fosfato dehidrogenase (GAPDH). Os animais foram distribuídos em cinco grupos: 1-controle; e 2 a 5- com 24, 48, 72 e 96 horas pós-inoculação, respectivamente. Fragmentos da bursa de Fabricius foram colhidos para processamento histológico e extração de RNA. Lâminas coradas em HE e TUNEL (marcação in situ da fragmentação do genoma com transferase terminal de deoxinucleotídeo) foram utilizadas na morfometria do índice apoptótico. Amostras de mRNA foram testadas para a expressão dos genes VP2 e GAPDH utilizando-se transcrição reversa e RT-PCR. Utilizou-se um kit SYBR GREEN PCR, e a reação foi desenvolvida em ABI Prism 7000 SDS. Os índices apoptóticos cresceram progressivamente indicando uma relação na atrofia bursal causada pelo VDIB. Paralelamente, os resultados da PCR em tempo real demonstraram queda da carga viral nas células linfóides da bursa nos diferentes intervalos de tempo do experimento. Esses resultados sugerem um papel protetor da apoptose na diminuição da replicação viral.

Twenty-nine SPF 1-day-old chicks were inoculated with infectious bursal disease virus (IBDV) to evaluate early apoptosis and the expression of viral protein 2 (VP2) and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenease (GAPDH). Five groups were formed: G1-control -and G2 to G5, - 24, 48, 72 and 96 hours post inoculation, respectively. Half of each BF was fixed and processed by routine techniques. To quantify apoptosis, 5µm-thick sections were stained with HE and submitted to TUNEL (terminal transferase UDP nick end labeling) technique. mRNA was extracted from pooled samples of 3 animals/group and used for the expression of VP2 and GADPH genes using the reverse transcription and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). A SYBR GREEN PCR kit was used and the reaction was carried out in an ABI Prism 7000 SDS. Apoptotic indexes progressively increased indicating a role of IBDV in inducing hypotrophy of the BF. Also, it was showed that as long as apoptosis increased, viral protein expression decreased, which suggests that apoptosis plays a role as a defense mechanism against viral replication.

Macrorhabdus ornithogaster in ostrich, rhea, canary, zebra finch, free range chicken, turkey, guinea-fowl, columbina pigeon, toucan, chuckar partridge and experimental infection in chicken, japanese quail and mice

Since 2000, Macrorhabdus ornithogaster "megabacteriosis" has been diagnosed in the avian diseases laboratory in a diversity of avian species and varied spectrum of disease. The disease in some species (chickens, turkeys, guinea fowls) was clinically characterized by emaciation, prostration, loss of appetite, cachexia and death, with a typically chronic course. A more acute disease was observed in finches (canary-Serinus and zebra-Taeniopygia) and budgerigars (Melopsittacus undulatus). The large rod shaped organism, visible from 100 times magnification, with and without staining, could be detected in sick and also in reasonably normal individuals of some species, such as chickens, turkeys, quails and pigeons. In rheas (Rhea americana), ostriches (Struthio camelus), canaries, zebra-finches, guinea-fowl (Numida meleagris) and budgerigars. The disease was severe, causing to up to 100 percent mortality. The infection could be detected in some species along with other infectious or disease problems, such as endoparasites (helminths, coccidia) and ectoparasitism (order Mallophaga or/and order Acarina). The cultivation of M. ornithogaster was successfully achieved in solid and liquid media, originated from chickens (four isolates), guinea fowl (1 isolate), chuckar partridge (1 isolate) and canary (1 isolate). A very interesting finding at microscopy was motility of M. ornithogaster, as detected both in cultures obtained on agar for pathogenic fungi and passaged into thioglycolate broth, as well as on samples observed in wet preparations from in vivo. Differences in colony aspects were noted among the isolates. Experimental infections were attempted in chicken and japanese quail, using a chicken isolate, allowing the detection of the organism in the proventriculus and liver in apparently normal birds. One chicken isolate was injected intraperitoneally in Balb/c mice and resulted in 100 percent mortality.

Desde 2000, diversos casos de infecção e doença por Macrorhabdus ornithogaster (megabacteria) foram diagnosticados no Setor de Doenças das Aves (Escola de Veterinária da UFMG). A doença clínica foi caracterizada por emagrecimento, prostração, perda do apetite, caquexia e morte, em curso crônico, embora com forma mais aguda em canários e periquitos. O microrganismo grande, em forma de bastão, visível a partir de 100 aumentos sem e com coloração, pode também ser detectado em aves de aspecto clínico normal, principalmente galinhas, perus, codornas e pombos. Em emas (Rhea), avestruzes (Struthio camelus), canários, mandarins, galinhas da Angola (Numida meleagris) e periquitos Australianos (Melopsittacus undulatus), a severidade da doença foi sempre maior, ocasionando até 100 por cento de mortalidade em alguns plantéis. Na maioria das espécies a doença foi detectada em aves com endo e/ou ectoparasitismo. O cultivo de M. ornithogaster foi obtido em meio sólido (ágar para fungos patogênicos) e subcultivado em meio líquido (thioglicolato), do proventriculo de galinha, galinha da Angola, perdiz de chuckar e canário. O resultado mais surpreendente na microscopia de M. ornithogaster foi a presença de motilidade, detectada tanto de cultivos in vitro quanto de preparações úmidas de in vivo. Diferenças nos aspectos das colônias foram notadas entre os isolados. Infecções experimentais em galinha (SPF) e codorna japonesa permitiram a detecção do organismo nos proventrículos das aves de aspecto normal. Nas codornas, à necropsia notaram-se hemorragias hepáticas. A infecção experimental em camundongos via intraperitoneal resultou em 100 por cento de mortalidade, também com lesões hepáticas. Aspectos do cultivo, a importância da doença, as espécies de aves susceptíveis e seu papel na epidemiologia são discutidos.

Genotyping of infectious bursal disease virus strains by restriction fragment length polymorphism analysis of the VP1, VP2, and VP3 genes.

SUMMARY. This study aimed to genotype infectious bursal disease virus (IBDV) isolates from the Minas Gerais state poultry industry. RNA was extracted from bursae obtained from field cases without passage or commercial vaccines. Genetic subtyping of IBDV isolates and vaccine strains was carried out by the reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) and restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis. A 588-bp fragment in the VP1 gene, an 847-bp fragment in the VP2 gene, and a 320-bp fragment in the VP3 gene were amplified by PCR and digested with restriction enzymes PstI and ScaI (VP1); BamHI, BstEII, and PstI (VP2); and NcoI, ScaI, and XbaI (VP3). Our work shows that complementing the clinical history of the outbreaks with RT-PCR followed by RFLP analysis using PstI for VP1, BamHI for VP2, and XbaI for VP3 allowed an accurate classification of a causative agent as a very virulent IBDV.

Estudo comparativo da virulência de amostras de vacina do vírus da doença de Newcastle em galinhas SPF por meio da análise morfométrica da espessura traqueal / Comparative morphometric analysis of vaccinal virulence of some lentogenic strains of Newcastle disease virus in tracheas of SPF chickens

A virulência das amostras de vacinas lentogênicas La Sota, Ulster e VG-GA do vírus da doença de Newcastle (VDN) foi determinada por análise morfométrica da espessura da traquéia de galinhas (n=12) de 45 dias de idade, livres de anticorpos anti-VDN, vacinadas por via intra-traqueal. As traquéias foram avaliadas 1, 2, 3, 4, 6 e 8 dias pós-vacinaçäo. A amostra La Sota induziu maior espessamento da traquéia no decorrer de todo período experimental. Ao terceiro dia pós-vacinaçäo, período em que as traquéias se apresentaram mais espessas, as amostras La Sota e Ulster näo diferiram em sua virulência, sendo ambas mais virulentas do que a amostra VG-GA, induzindo maior espessamento de traquéia e causando lesöes histológicas mais severas

Resultados preliminares da utilizaçäo de cultivos de anéis de traquéia para o estudo de estirpes brasileiras do vírus da bronquite infecciosa das galinhas / A preliminary use of tracheal organ cultures for evaluating Brazilian infectious bronchitis virus strains

Tracheal organ cultures (TOC) were prepared and used for evaluating four Brazilian isolates of infectious bronchitis virus (IBV). IBV field isolates and vaccine strains were titrated in TOC and results compared to those from chicken embrionated eggs. Serum neutralization (SN) employing IBV strain-specific serum was performed for evaluating relationships between isolates. Titration results of tests performed in TOC or eggs were in mutual agreement and were considered for validating the adapted TOC methodology as alternative for virological studies in our laboratory. Sera specific to M41 (Massachusetts) or A5968 (Connecticut) did neutralize their respective IBV strains only. Field strains 208 and 29-78 specific sera did neutralize Massachusetts serotype strains M41 and H120, but PM2 serum did only M41. Strain PM4 specific serum did not neutralize any of the reference IBV analyzed, including M41, A5968 and H120 and may indicate that the isolate is serologically different from the Massachusetts serotype, currently adopted for vaccine strains in Brazil

Fatal sarcosporidiosis in a passerine of species Gnorimopsar chopi chopi

Relata-se um caso fatal de sarcosporidiose em pássaro-preto (melro), Gnorimopsar chopi chopi, caracterizado por intensa prostraçäo, respiraçäo superficial e decúbito lateral. Embora nao tenham sido observadas alteraçöes significativas no sistema respiratório, o quadro clínico confundia-se com doença nesse sistema, em decorrência do comprometimento dos músculos ligados à respiraçäo

Production of monoclonal antibodies against conserved components of infectious bronchitis virus

Murine hybridomas producing IgG1 monoclonal antibodies (Mabs) against N and S2 (subscript) proteins (53KDa and 82 KDa, respectively) from avian infection bronchitis virus (IBV) strain M41 were generated by the fusion of a myeloma cell line (Sp2/0-Ag14) with spleen cells from Balb/c mice previously immunized with whole virus IBV M41. Post-fusion screening criterion was by ELISA and 36 positive hybrids were generated after fusions. Two hybrids specific to N (N3F10) and S2 (subscript) (S12B2) proteins from M41 (serotype Massachusetts) were selected by western blotting. These Mabs recognized the Ark-99 (serotype Arkansas) and A5968 (serotype Connecticut) IBV strains in addition to M41. By ELISA, the Mab against the S2 (subscript) (S12B2) recognized all reference and Brazilian strains (M41, SE-17, H52, 297, 283, PM-1, PM-2, PM-3, 351, 29-78 E 327) studied, while the Mab against N recognized only six (M41, SE-17, H52, 283, 327 e 297) strains. The Mab against S2 (subscript) may become a useful tool for IBV detection on the routine diagnosis of infectious bronchitis, especially for helping the differential diagnosis of clinically and pathologically confusing diseases, while the Mab against N (N3F10) recognized a probably less conserved region among the strains and may be interesting to comparing IBV isolates

Produçäo e caracterizaçäo de anticorpos monoclonais contra o vírus da bronquite infecciosa das galinhas / Production and characterization of monoclonal antibodies specific to infectious bronchitis virus

Um painel de anticorpos monoclonais (AcM) específicos contra o vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBIG) amostra Massachusetts M41 foi desenvolvido com a finalidade de possibilitar ferramentas para futuros estudos de amostras locais de VBIG. Os clones produtores de AcM foram detectados e caracterizados por ELISA, e para a determinaçäo quanto à especificidade ao componente de VBIG foi utilizado western blotting (WB). Os híbridos produtivos foram clonados por diluiçäo limitante, expandidos in vitro e mantidos em nitrogênio líquido. As bandas protéicas reconhecidas em WB pelos AcM apresentaram pesos moleculares que variaram de 180 a 30 kDa. Oito AcM reconheceram apenas um polipeptídeo e quatro ligaram-se ao polipeptídeo S (3, 18, 52 e 57) inteiro, com a banda de peso molecular aproximado de 180 kDa. Cinco AcM (5, 12, 41, 70 e 72), ligaram-se em mais de uma banda de VBIG. Outros sete AcM näo se ligaram a nenhum polipeptídeo de VBIG. Entre os AcM que apresentam perspectivas de utilizaçäo em pesquisa e diagnóstico de VBIG incluem-se os produzidos pelo clone 42, dirigido contra S1, os produzidos pelos clones 34, 43 e 71, dirigidos contra S2, pelos clones 7 e 22, dirigidos contra M e pelos clones 15 e 50, cujos AcM reagiram contra a nucleoproteína N

An outbreak of malaria by Haemoproteus columbae in pigeons

Relata-se um surto de malária por Haemoproteus columbae em pombos-correio (Columba livia), caracterizado por um quadro agudo com mortalidade de 3 por cento ao dia em aves de aspecto saudável ou crônico com prostraçäo e fraqueza. O exame clínico das aves doentes evidenciou sinusite e conjuntivite e à necropsia traqueíte hemorrágica, aerossaculite, esplenomegalia, nefromegalia e hepatomegalia com hemorragias. O díptero hematófago da família Hippoboscidae Pseudolynchia canariensis foi encontrado inserido entre as penas dos indivíduos. Esfregaços de sangue periférico e cardíaco e impressöes de baço e fígado corados por Giemsa permitiram a visualizaçäo de inclusöes intraeritrocitárias características de Haemoproteus columbae

Afinidades antigênicas de amostras de campo do vírus da bronquite infecciosa das galinhas com a amostra Massachusetts M41 / Antigenic affinities of infectious bronchitis virus field isolates to Massachusetts M41 strain

Com o objetivo de avaliar as afinidades antigênicas entre 14 amostras de vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBIG) isoladas de casos clínicos ocorridos entre 1972 e 1989 no Estado de Minas Gerais, sua reatividade frente a dois anticorpos monoclonais (AcMs) específicos contra a glicoproteína S1(subscrito) do sorotipo Massachusetts de VBIG foi examinada em ELISA. As 14 amostras de campo estudadas foram agrupadas,de acordo com o relacionamento antigênico aos AcMs, em relacionadas (três amostras) e näo relacionadas (onze amostras) à amostra M41 do sorotipo Massachusetts. As amostras de campo näo reconhecidas, considerando a alta especificidade dos AcMs à amostra M41, compöem uma diversidade que pode variar de integrantes do sorotipo Massachusetts de origem vacinal a sorotipos heterólogos. Amostras com afinidade antigênica à M41 (208-1972, PM1-1987 e PM2-1987) foram detectadas, o que configura a preservaçäo da amostra no campo, apesar da alta variabilidade da glicoproteína S1(subscrito), já que foram isoladas de surtos de doença natural nas regiöes de avicultura de Minas Gerais. A detecçäo de antígenos de alta variabilidade que caracterizam a amostra M41, apesar das pressöes da imunidade dos plantéis e da mutabilidade, pode indicar que os antígenos de alta afinidade aos receptores celulares (best fit) que atingiram alto estágio evolutivo podem estar sendo preservados

Mortalidade por nematódeos filarióides em passeriformes da espécie Oryzoborus maximiliani no Brasil / Mortality by filarial nematodes in passeriformes of species Oryzoborus maximiliani in Brazil

Descreve-se a ocorrência de filariose em passeriformes da espécie Oryzoborus maximiliani (bicudo) mantidos em cativeiro. Os sinais clínicos incluiram insuficiência respiratória e prostraçäo, evoluindo para decúbito lateral e morte. Todos os indivíduos adoeceram e morreram em poucos dias. As lesöes mais significativas foram encontradas nos pulmöes, que estavam acinzentados na regiäo adjacente ao saco aéreo abdominal. Impressöes do pulmäo observadas ao microscópio em 100 aumentos permitiram a visualizaçäo de grande número de formas alongadas típicas de nematódeo. Considerando suas dimensöes e os relatos da literatura consultada, especulou-se a possibilidade de filariose. As condiçöes de estresse de captura e cativeiro podem ser determinantes do quadro agudo observado, o que permite sugerir esta suspeita em casos semelhantes. Considera-se importante, entretanto, a possibilidade de a manifestaçäo clínica na forma crônica ou assintomática poder ser mais comum que a aguda

Criopreservaçäo de uma amostra de espiroqueta em nitrogênio líquido / Cryopreservation of an avian spirochete strain in liquid nitrogen

Soros de aves experimentalmente infectadas, contendo espiroquetas viáveis, foram submetidos a dois procedimentos antes da criopreservaçäo: glicerol na diluiçäo de 1/2 (v/v), designado como soro com glicerol a 50 por cento (GS), e dimetilsulfóxido na proporçäo de 1/10 (v/v), designado como soro com DMSO a 10 por cento (DS). Após 15 meses de estocagem em nitrogênio líquido, amostras dos tratamentos GS e DS foram descongeladas e suas infectividades foram testadas em frangos susceptíveis. Apesar de ambos os procedimentos terem mantidos a infectividade da bactéria, DMSO a 10 por cento no soro de frango apresentou-se mais satisfatório como criopreservante